黄曲霉毒素(aflatoxin,汉中AF)是市市售植由黄曲霉(Aspergilusflavu)和寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)经聚酮途径所产生一组有毒次生代谢产物,其结构含有一个二呋喃环与一个氧杂萘邻酮。物油污染目前已知的中黄状况黄曲霉毒素有20多种,已分离鉴定出的曲霉有黄曲霉毒素有 B 1、B 2、毒素调查G 1、汉中G 2 等18种,市市售植其中AFB1毒性和致癌性最强。物油污染自然环境下,中黄状况农作物如水稻、曲霉油菜籽、毒素调查花生等,汉中在种植后生长、市市售植收获的物油污染过程中,很容易被产毒真菌污染,被污染的谷物,在储藏、加工、运输等过程通过食物链各个环节传递最终危害人类健康。联合国粮食与农业组织(FAO)统计,每年全球粮食将近有四分之一受到真菌毒素污染,造成了数以亿计的经济损失。AF的产毒需要适宜的温湿度和经济发展情况有关,热带和亚热带地区降水多、温度高的地区食品受黄曲霉毒素的污染情况较严重,欧美经济发达地区的污染状况远低于东南亚等经历落后地区。
经过大量文献查阅,胡佳薇等人评价过2012-2015陕西市售食品中AF的污染情况,对于陕南地区总体的市售食品进行了调查,未见关于汉中地区植物油中黄曲霉毒素的系统污染调查分析,也为见关于该地区植物油中毒素超标的相关报告和处罚。汉中地处陕西南部,全年气候湿润,降水丰沛,陕西最大的优质油菜籽种植基地,有“陕西鱼米之乡”的美称,菜籽油是当地居民膳食结构中的主要品种。随着社会经济的发展,商品流通加速,汉中市场上除了本地产菜籽油外,还有来自其他地区的大豆油、花生油、调和油、香油等。本研究结合汉中当地的种植条件和饮食习惯,从8个行政区县中采集了160份植物油,进行4种AF的联合污染状况的调查,评估该地区植物油中AF污染状况,系统掌握该地区AF的污染情况,为食品安全控制和当地居民的AF膳食暴露评估提供依据。
2019年1月至2020年12月,陆续对汉中市的8个行政区县的超市商场、粮油店、生产企业、餐饮店按照行政区域为分成特征进行随机采集(见图1、图2)。累计共采集到食用植物油160份(其中菜籽油120份,花生油、大豆油、调和香油等40份)。逐批采样后封存,干燥阴凉处保存,备检。
水浴恒温振荡器(常州亿能实验仪器厂),分析天平(日本岛津 d=0.01 g);氮吹仪(睿科科技有限公司);高效液相色谱仪(日本岛津LC-20AD,荧光检测器);光化学衍生器、C18色谱柱(月旭科技有限公司);黄曲霉毒素免疫亲和柱3mL(Rome labs);MIlli-Q纯水机(美国密理博公司)。
甲醇(色谱纯,赛默飞);吐温-20(分析纯,科密欧)氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾(分析纯,科龙),黄曲霉毒素标准溶:AFG2 0.537 μg/mL,AFG1 0.539 μg/mL , AFB2 2.08 μg/mL,AFB1 2.07 μg/ mL(青岛普瑞邦 STD#1081)。
按照国标GB5009.22-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》第三法高效液相色谱-柱后衍生法进行试验。
样品提取:称取5.0 g(精确至0.01g)粉碎混合均匀样品于离心管中,加入甲醇水溶液(80+20)20 mL涡旋混合,摇床中震荡1 h,玻璃滤纸过滤,滤液备用。
样品净化:将免疫亲和柱取出恢复至室温,准确吸取2 mL滤液,加入25 mL的PBS溶液于25 mL注射器中,以2 mL/min速度匀速下滴,样液滴完后,用10 mL的水淋洗亲和柱2次,最后用2 mL甲醇洗脱亲和柱,收集洗脱液,氮气吹干用流动相定容至1mL,涡旋,过滤膜,装瓶上机检测。该法的检出限为AFG2 0.01 μg/mL,AFG1 0.03 μg/mL,AFB2 0.01 μg/mL,AFB1 0.03 μg/ mL。
流动相:甲醇-乙腈-水(47:3:50,V/V);进样量:20 μL;检测波长:激发波长:360 nm,发射波长440 nm;流速:0.8 mL /min;柱温:35℃;色谱柱:月旭C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)。
全球有 100 多个国家和地区制订了食品和饲料中 AFT限量标准。我国在GB2761-2017仅对食品中AFB1采取了严格的限量标准,植物油(不包括玉米油、花生油)均要求≤10 μg/kg,玉米油、花生油要求≤20 μg/kg,暂时没有关于AF总量的限量要求。
用AF混标配制标准曲线,具体梯度为(ng/mL):AFB1:1.04、2.08、3.12、4.16、5.20、10.4;AFB2:1.03、2.07、3.10、4.14、5.18、10.3;AFG1:0.27、0.54、0,81、1.08、1.35、2.70;AFG2:0.27、0.53、0,80、1.06、1.33、2.66,通过光化学衍生器柱后衍生,带荧光检测器的高效液相色谱分离测定,得出各组分不同浓度下的峰面积,以峰面积对标品的浓度进行线性回归分析,结果见表1。
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