硫酸特布他林,化学主要成分为(±)-α-[(叔丁氨基)甲基]-3,发光法测5-二羟基苯甲醇硫酸盐(2∶1),是定硫的含一种选择性β2受体激动剂,对于肺气肿、酸特慢性支气管炎、布林支气管哮喘和其他伴有支气管痉挛的化学肺部疾病有比较显著的疗效。目前,发光法测关于硫酸特布他林含量的定硫的含测定方法有多种,包括分光光度法、酸特毛细管电泳法、布林高效液相色谱法、化学气相色谱法、发光法测超高效液相色谱-质谱法和循环伏安法,定硫的含然而,酸特这些方法存在仪器设备复杂、布林灵敏度低等缺点。目前,已有学者利用化学发光分析法测定了硫酸特布他林的含量,但采用高锰酸钾-甲醛化学发光体系测定硫酸特布他林含量的方法国内尚未见报道。在酸性条件下,高锰酸钾可以作为氧化剂氧化硫酸特布他林,产生微弱的化学发光信号,甲醛作为增敏剂加入后,化学发光信号增强。根据化学发光强度与硫酸特布他林浓度的线性关系,可定量测定硫酸特布他林的含量。
1实验部分
1.1仪器
MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪-电化学分析仪,MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪-多功能化学发光分析仪,IFIS-D型智能流动注射进样器。
1.2试剂与样品
实验中所用试剂均为分析纯。硫酸特布他林标准品由中国药品生物制品检定所购买,硫酸特布他林药片和雾化液由药店购买。
硫酸特布他林标准溶液:准确称取一定质量硫酸特布他林标准品,用去离子水溶解定容,备用。
硫酸特布他林片剂样品溶液:对10片硫酸特布他林药片准确称重,得到每片药片的平均质量。研细药片,分散均匀后准确称取一定质量的硫酸特布他林药品粉末,用去离子水溶解并定容,过滤,取滤液备用。
硫酸特布他林雾化液样品溶液:准确量取一定体积的硫酸特布他林雾化液,用去离子水稀释定容,备用。
1.3实验方法
实验流程如图1所示。a,b,c,d分别为硫酸特布他林、硝酸、甲醛和高锰酸钾4种溶液,通过蠕动泵和三通阀汇聚于八通阀并发光,光电倍增管(电压为600V)将光信号转化为电信号并放大后,由计算机记录结果。利用峰高与硫酸特布他林的浓度关系进行含量测定。
2结果与讨论
2.1实验条件的探究
2.1.1酸种类的探究
利用高锰酸钾-甲醛化学发光体系测定硫酸特布他林的含量是以酸为介质,不同种类酸环境对实验的影响较大,因此选择一种有利于反应体系的酸性条件尤为重要。选取2.0mol·L-1的硫酸、盐酸、硝酸、磷酸进行探究,发现硝酸介质中体系的化学发光信号最强,因此确定硝酸为最佳酸性介质。
2.1.2硝酸最佳浓度的探究
探究硝酸浓度对体系的影响:在0.2mmol·L-1高锰酸钾、1.0%甲醛和10.00μg·mL-1硫酸特布他林的条件下,探究了0~3.0mol·L-1范围内的硝酸浓度对体系光信号的影响。实验发现,在0~3.0mol·L-1范围内,随硝酸浓度的增加体系的光信号逐渐增加,但硝酸本底值也逐渐变大,而信噪比出现先增大后减小的趋势,且当硝酸浓度为1.5mol·L-1时,信噪比最大,如图2所示。故选择硝酸的最佳浓度为1.5mol·L-1.
2.1.3高锰酸钾最佳浓度的探究
高锰酸钾在体系中作为氧化剂氧化硫酸特布他林,产生化学发光信号,因此,需探究高锰酸钾浓度对体系的影响:在1.5mol·L-1的硝酸、1.0%甲醛、10.00μg·mL-1硫酸特布他林条件下,探究了在0~1.0mmol·L-1范围内高锰酸钾溶液从低浓度到高浓度引起体系化学发光信号强度的变化情况。由图3可以发现,高锰酸钾浓度在0~0.2mmol·L-1范围内时,光信号强度呈现上升的趋势;在0.2~1.0mmol·L-1范围内,光信号强度呈现下降的趋势,故本实验选取0.2mmol·L-1为高锰酸钾的最佳浓度。
2.1.4甲醛最佳浓度的探究
高锰酸钾氧化硫酸特布他林反应体系中加入甲醛后,化学发光强度明显增强。因此,探究了甲醛浓度对化学发光体系的影响:实验在1.5mol·L-1的硝酸、0.2mmol·L-1的高锰酸钾、10.00μg·mL-1硫酸特布他林的条件下,对甲醛体积浓度在0~5.0%(V/V)范围内进行探究。体系的光信号随甲醛浓度的增加明显增强,甲醛的本底值也随其浓度的增加而逐渐增加,而信噪比在甲醛浓度为1.0%(V/V)时出现最高值,如图4所示。故选用甲醛的最佳浓度为1.0%(V/V).
2.2干扰试验
体系在最佳实验条件时,对10.00μg·mL-1的硫酸特布他林标准溶液进行干扰实验。结果显示,当干扰水平低于±5%时,500倍的氯化钙、氯化钾、碳酸钠,300倍的蔗糖、淀粉、硫酸镁,100倍的葡萄糖,50倍的氯化铁和15倍的硫酸锌无干扰。
2.3样品含量、精密度和准确度的测定
2.3.1标准曲线及检出限
根据1.3实验方法,在1.5mol·L-1硝酸、0.2mmol·L-1高锰酸钾和1.0%甲醛条件下,测得硫酸特布他林的浓度在0.5~80.0μg·mL-1范围内与体系的化学发光强度I呈现良好的线性关系,线性回归方程为I=2.2512C+3.9544,r=1.0000,检出限为0.25μg·mL-1.
2.3.2样品含量及精密度
根据1.3实验方法,在1.5mol·L-1硝酸、0.2mmol·L-1高锰酸钾和1.0%甲醛条件下,对标示量为10.00μg·mL-1的硫酸特布他林样品溶液进行测定,测得雾化液和药片含量分别为10.68μg·mL-1和10.11μg·mL-1,见表1。对10.00μg·mL-1溶液进行11次平行测定,相对标准偏差为0.6%,结果表明该方法精密度良好。
2.3.3加标回收率
为验证实验准确度,向浓度为10.00μg·mL-1的硫酸特布他林样品溶液中加入已知量的硫酸特布他林标准溶液,进行回收检验,测得其雾化液和药片中硫酸特布他林平均回收率分别为99.8%和102.3%。如表1所示,结果满意。
3结论
在硝酸介质中,以高锰酸钾为氧化剂氧化药物硫酸特布他林产生化学发光信号,加入甲醛作增敏剂提高化学发光强度,以此测定药物硫酸特布他林雾化液和片剂的含量。该方法灵敏度和准确度较高,精密度好,为测定药物硫酸特布他林含量提供了一种新方法,具有一定的实际应用价值。
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