3、咪唑正交试验优化提取工艺结果讨论
由表2分析可知,类离A因素中各水平影响顺序为A3>A2>A1,液体叶总B因素中各水平影响顺序为B3>B2>B1,沙棘C因素中各水平影响顺序为C3>C2>C1,黄酮D因素中各水平影响顺序为D2>D3>D1,咪唑E因素中各水平影响顺序为E2>E3>E1。类离影响沙棘叶中总黄酮提取率因素的液体叶总大小顺序为:B>D>E>C>A,即微波功率>料液比>离子液体浓度>微波温度>微波时间,沙棘微波功率对棘叶的黄酮总黄酮提取率影响最大。最佳提取工艺条件为A3B3C3D2E2,咪唑即微波时间6min,类离微波功率500W,液体叶总微波温度80℃,沙棘料液比1∶20(g·mL-1),黄酮溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑浓度1.0mol·L-1。
4、验证试验
由于优化的提取工艺正交试验结果表中没有,为了进一步验证优化方法的可靠性,按优化工艺进行验证试验。准确称取未洗阴干沙棘叶粉末1.0g,在最佳提取工艺:微波时间6min,微波功率500W,微波温度80℃,料液比1∶20(g·mL-1),离子液体浓度1.0mol·L-1的条件下提取沙棘叶总黄酮,测得提取率为10.63%,该提取率高于表3.1中的每一项提取率。验证结果表明,优化后的提取工艺结果可靠。
5、不同前处理的沙棘叶对提取效果的影响
由图8可知,沙棘叶前处理方式不同,总黄酮提取率略有差别。总黄酮提取率大小顺序为:
G>A>F>B>D>C>E,即炒制(5月份)>水洗阴干(6月份)>自然干晒(5月份)>未洗阴干(6月份)>炒制(6月份)>发酵阴干(6月份)>蒸青制作(5月份)。其中,炒制(5月份)沙棘叶总黄酮提取率最高。
6、沙棘叶总黄酮抗氧化活性试验结果讨论
由图9、10可以看出,VC与沙棘叶总黄酮对DPPH自由基的清除率与浓度成正比。VC对DPPH自由基清除率IC50=0.0019mg·mL-1。沙棘叶总黄酮的浓度对DPPH自由基的清除率IC50=0.0511mg·mL-1。虽然沙棘叶总黄酮对DPPH自由基的清除率小于VC,但也具有一定清除力。
三、结论
本试验采用单因素分析结合正交试验的方法,研究了影响沙棘叶总黄酮提取率的因素以及最佳提取工艺,并研究了最佳提取条件下提取的总黄酮对DPPH自由基的清除率。研究结果显示,影响沙棘叶总黄酮提取率因素的大小顺序为:微波功率>料液比>离子液体溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑浓度>微波温度>微波时间。其中微波功率对沙棘叶总黄酮的提取率影响最显著。最佳提取工艺为:料液比1∶20(g+mL-1),微波功率500W,微波温度80℃,微波时间6min,离子液体溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑的浓度1.0mol·L-1在该提取条件下,沙棘叶总黄酮提取率平均值为10.63%。炒制沙棘叶(5月采摘)总黄酮提取率最高。由抗氧化活性研究试验结果得知,该工艺下提取的沙棘叶总黄酮对DPPH自由基具有较好的清除能力。
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